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    qPCR Kit (經典法)

    簡要描述:

    熒光定量PCR法(qPCR):是在常規PCR基礎上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記,使PCR擴增后的產物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進行DNA擴增反應的實時監測,簡稱qPCR。

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    qPCR Kit  (經典法)

    Venor®Gem qEP

     

    品名

    貨號

    規格

    價格

    qPCR Kit  (經典法)

    Venor®Gem qEP

    11-9025

    25次/盒

    詢價

    11-9100

    100次/盒

    詢價

    11-9250

    250次/盒

    詢價

     

     支原體qPCR法介紹:

    熒光定量PCR法(qPCR):是在常規PCR基礎上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記,使PCR擴增后的產物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進行DNA擴增反應的實時監測,簡稱qPCR。

    優點:①靈敏度高、特異性強。

              ②時間短,2-3小時出結果。

              ③檢測結果可定量。

              ④操作簡便。

     

    缺點:①對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結果會出現假陽性。(可用培養法做補充驗證)

              ②不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大(由于引物及內在設計不同),需謹慎選擇,盡量在專業人員推薦指導下使用。

     

     

     

    『支原體qPCR檢測試劑盒』介紹

    德國MB公司生產的支原體qPCR檢測試劑盒(均為探針法檢測),依據操作步驟的細微差別,

    分『經典法』和『一步法』兩種。    

    此兩類試劑盒較全球其他廠家同類產品,具有以下獨特的優點:

    ①經典法qPCR試劑盒遵循歐洲藥典流程要求

    ②高特異性,一次檢測即可涵蓋了所有可能感染細胞的支原體物種(涵蓋歐洲藥典規定的9種支原體),根據序列一致性,至少可以檢測到107種支原體物種。操作簡單,易于觀察。

    (使用MB的試劑盒,下表中列出的支原體物種均為陽性,其他微生物或真核細胞均為陰性,無交叉反應)

    ③高靈敏度,MB公司的經典法試劑盒檢測限可達到≤10CFU/ml。

    MB公司的一步法qPCR試劑盒檢測限≥50個基因組/反應。

     

    ④MB公司有相應配套的10CFU/100CFU的敏感度測試的標準品,便于方法學驗證。

    ⑤MB公司有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。

    ⑥MB公司有相應配套的支原體絕對定量標準品,便于最后定量檢測。

     

     

    特點

    1. 內控對照為獨立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

    2. 高特異性,一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細胞的支原體物種(包括歐洲藥典規定的9種支原體)。與細菌和真核DNA無交叉反應。

    3. 高靈敏度,檢測限可達到≤10CFU/ml。 

    4. 有相應配套的支原體基因組DNA和細菌基因組DNA,便于特異性驗證。

    5.有相應配套的支原體絕對定量標準品,便于最后定量檢測。

     

    操作步驟

    1步:樣本處理

    a.細胞培養上清

    b. 生物藥或需遵循藥典的樣本 

    說明:①樣品基質可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。

              ②細胞培養物樣本含豐富的DNA酶,在低溫下也能降解支原DNA,影響檢測靈敏度。

              建議:樣本做DNA抽提處理,實現最高靈敏度。

              推薦:德國MB公司生產的專用支原體DNA提取試劑盒

              Venor® Gem Sample Preparation Kit

              該DNA抽提試劑盒已經過廣泛驗證。

     

    2步:試劑制備

    a. 凍干粉溶解

     

    b. 反應體系制備

    b1) 樣品為細胞上清篩查——反應體系制備

     

    b2) 樣品為生物藥——反應體系制備

     

    3步:啟動熒光定量PCR儀

     

    4步:結果判別

    FAM通道:檢測支原體熒光信號。HEX通道:檢測內控對照熒光信號。

    支原體DNA和內控DNA存在信號的競爭性抑制。

    支原體DNA越多,FAM通道信號越高,檢測內控對照的HEX通道信號越低。

    定量需基于Ct值和DNA標準曲線。

    Ct<40為陽性結果。Ct≥40為陰性結果。

     

    示意圖:

     

     

    儲存條件

    2~8℃保存至少12個月。復溶后-18℃以下保存。

     

     

    效期

    1年6個月

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